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nssb.huajx.com摘要： 目的采用HPLC测定番石榴叶及其制剂消渴*中槲皮素的含量。方法KromasilC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.4%，磷酸溶液（55：45）；检测波长：372nm。结果槲皮素在0.1～1.0μg范围内具有良好的线性关系，相关系数r=0.9999，平均加样回收率101.07％，RSD=1.37％（n=5）。结论方法简便、准确、重现性好，可作为番石榴叶及其制剂消渴*中槲皮素的含量测定方法。
关键词： 番石榴叶；消渴*；槲皮素； 液相色谱法；含量测定
番石榴叶为桃金娘科植物番石榴Psidium guajavaL．的干燥叶及带叶嫩茎，分布于华南各地至四川西南部，含有β-谷甾醇、槲皮素、番石榴苷、无色矢车菊素、番石榴酸等成分。现代药理研究表明，番石榴叶提取出的总黄酮苷及单黄酮苷具有降血糖作用；其单味药制剂消渴*收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第十五册，用于轻度及中度成年糖尿病的治疗。番石榴叶及其制剂的含量测定未见报道，本实验采用液相色谱法对番石榴叶及消渴*中槲皮素的含量进行了测定，取得满意的结果。
1 仪器与试药
/液相色谱仪/，515泵，2487紫外检测器（美国Waters公司）；N-2000色谱工作站（浙江大学）；TU-1900紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）。槲皮素对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号0081-9905）：番石榴叶为市场所购（产地广西）；消渴*为广西医科大学制药厂提供。水为双蒸水，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.4％磷酸溶液（55：45）；检测波长：372nm；流速：l.0mL／min：柱温：30℃；进样量：10μL。
2．2 测定波长的选择
取槲皮素对照品的甲醇溶液置紫外分光光度计中进行光谱扫描，其zui大吸收波长为372nm，与文献报道的371nm基本一致，故选择372nm作为测定波长。
2．3 线性关系的考察
精密吸取浓度为0.1008mg／mL的槲皮素对照品溶液1、2、4、6、8、10mL，分别置1OmL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取10μL进样，测定其峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。其槲皮素回归方程为：A=1315133.149×C-7744.002，相关系数r=O．9999。结果表明，槲皮素在0.1～1.0μg范围内具有良好的线性关系。
2，4 稳定性试验
分别精密吸取同一供试品溶液（20030101），于0、3、6、9、12h进样，测定槲皮素峰面积积分值。结果表明，12 h内峰面积积分值无大的变化，RSD=O.51％。
2．5 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液（20030101），重复进样5次，测定槲皮素峰面积积分值，其RSD=0.46％。
2．6 重现性试验
取同一批样品（20030101）5份，平行提取5份，测定槲皮素平均含量为0.7431mg／粒，RSD=1.37％。
2．7 加样回收试验
采用加样回收法，精密称取已测定含量的同一批号样品（20030101）5份，每份0.5g，分别精密加入浓度为0.0872mg／mL槲皮素对照品溶液l5mL和甲醇35mL，按样品测定项下游离槲皮素的含量测定方法处理，测定含量，并计算回收率。
2．8 样品测定
2．8．1 游离槲皮素 取消渴*10粒内容物，精密称定，混匀，取约1g，精密称定，精密加入甲醇5OmL，称定重量，置水浴上加热回流30min，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，注入液相色谱仪/。
2．8．2总槲皮素取消渴*内容物约1g，精密称定，精密加入甲醇一盐酸（19：1）50mL，同法处理及测定。
2．9 番石榴叶药材的测定
取药材细粉3g，精密称定，同上法处理并测定游离槲皮素及总槲皮素含量。
3 讨论
本实验采用液相色谱/测定，该法简单快速，稳定准确，其槲皮素峰与相邻峰分离较好，可作为番石榴叶及消渴*的含量测定方法。番石榴叶总槲皮素含量是游离槲皮素的13倍，由于槲皮素是黄酮苷元，说明番石榴叶中槲皮素主要以结合形式存在于黄酮苷中。
消渴*每粒相当于原药材3g，以游离槲皮素计算，其转移率为62％；而以总槲皮素计算，其转移率只有7.8％。说明消渴*的水煮醇沉工艺欠妥，其有效成分总黄酮苷转移率太低，这与黄酮苷易溶于醇、较难溶于水的化学性质有关。建议厂家改进生产工艺，采用醇提取，以提高有效成分含量及番石榴叶的利用率。
参考文献：
[1]国家*《中华本草》编委会．中华本草（第五册）[M]．上海：上海科学技术出版社，1998．642．
[2]陈德昌．中药化学对照品工作手册[M] ．北京：中国医药科技出版社，1999．169．
[3]卫生部药典委员会．卫生部药品标准中药成方制剂第十五册[S]．1997．182．
